人工瘤胃评价屎肠球菌对瘤胃发酵的影响

【目的】探讨屎肠球菌对瘤胃发酵的影响,以此评价屎肠球菌能否作为直接饲用微生物用于反刍动物的生产。【方法】利用持续动态人工瘤胃装置,采用完全随机试验设计,以不添加屎肠球菌发酵液为对照,研究了添加1.25×106和6.25×106mL-1屎肠球菌发酵液对瘤胃液pH、微生物蛋白(MCP)、氨态氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度的影响。【结果】添加屎肠球菌对瘤胃pH值和MCP无显著影响(P>0.05),但能显著提高瘤胃NH3-N浓度(P<0.01);与对照组相比,1.25×106mL-1屎肠球菌液添加组显著提高了瘤胃液的乙酸与总挥发性脂肪酸浓度(P<0.05),而添加屎肠球菌对瘤胃丙酸和丁酸浓度及乙酸与丙酸的比例没有显著影响(P>0.05)。【结论】添加一定量的屎肠球菌,可在不改变瘤胃发酵类型的情况下促进饲料中碳水化合物的消化。     

微囊化屎肠球菌活菌制剂的研究

【目的】研究制备新型微囊化屎肠球菌活菌制剂的方法。【方法】采用发酵前包被工艺,对屎肠球菌进行微囊化,在加入适量氯化钙的MRS培养基中进行固化培养,过滤收集微胶囊,45℃干燥后得到微囊化屎肠球菌活菌制剂。采用平板菌落计数法评价其对80℃高温、模拟胃肠液及常温贮藏条件的耐受能力。【结果】采用发酵前包被工艺获得的微囊化屎肠球菌液态产品的活菌数较发酵后包被工艺提高了2 lgCFU/mL。通过在发酵培养基中加入2 g/L氯化钙,并在45℃条件下烘干,不仅可以得到球形度好、大小均匀的微囊化屎肠球菌固态产品,而且其活菌数可以达到11.57 lgCFU/g。与游离屎肠球菌固态产品相比,微囊化屎肠球菌活菌制剂具有更强的耐受80℃高温及模拟胃肠液的能力(P<0.01),在常温条件下储存2个月,活菌数基本没有变化。【结论】微囊化屎肠球菌活菌制剂的发酵前包被制备工艺简单、产品形态较好、抗逆性强、稳定性高,且具有较高的包埋率,可以作为饲用高活性微生态制剂应用于生产实际。     

粪产碱菌耐铵工程菌与水稻联合共生固氮作用

粪产碱菌（ Ａａｅｃａｌｉｓｆａｅｃａｌｉｓ） 在ＬＷ 培养基下能产生植物激素ＩＡＡ。盆栽结果表明,接种Ａ．ｆａｅｃａｌｉｓ 显著提高了水稻的生长,接种Ａ１５０１ 和Ａ１５１３ 的水稻稻谷产量分别比未接种提高了８５％ 和１０３ ％ ,用１５ Ｎ 同位素稀释法估测水稻地上部总氮中来源联合固氮的百分率达９００ ％ 和１１５ ％ ,其结果与水稻地上部（ 茎叶及稻谷） 总氮量的增加幅度（８６ ％ 和１１６ ％ ）基本一致。研究还表明Ａ１５１３ 耐铵工程菌的产ＩＡＡ作用以及对水稻的生长和产量、联合固氮作用均优于原始菌株Ａ１５０１ 。     

一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响

为研究牦牛肠黏膜源屎肠球菌G2对健康小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响,试验设置对照组(CON)、热灭活菌组(EHK)、活菌组(ENT)3个处理组,每组8只C57BL/6小鼠,共计24只。CON组、EHK组、ENT组于正式试验期第1、2、4、6天按0.1 mL/只分别灌胃M17培养基、热灭活菌液和活菌菌液,灌胃前无菌收集小鼠粪便进行乳酸菌总菌计数,第8天处死小鼠取样。结果表明:ENT组乳酸菌总菌数量在第3、5天显著大于CON组与EHK组(P <0.05);各组小鼠结肠病理学评分无显著差异,但ENT组隐窝深度显著高于CON组与EHK组(P <0.05);各组间肠黏膜免疫因子Reg3β、Reg3γ和MUC2基因mRNA表达量差异不显著,TNF-α表达量ENT组显著低于CON组(P <0.05)。综上可知,牦牛源屎肠球菌G2可能为一种肠道过路菌,能在短时间内提高肠道乳酸菌的总数,一定程度上具有改善肠道形态和促进肠道健康的作用。     

致动物脑膜炎粪肠球菌人工感染小鼠脑部模型的建立

为了构建粪肠球菌人工感染小鼠脑部损伤模型,以清洁级昆明小鼠为实验动物,将实验室保存的致羔羊脑膜炎粪肠球菌进行复苏,用寇氏法测定小鼠半数致死量(LD50),并以LD50剂量、1/2 LD50的剂量、2/3 LD50剂量感染小鼠,观察临床症状,选择2、4、8、12、24、36、48、60、72、84 h共10个时间点,无菌取其脑部、内脏组织进行细菌的分离鉴定,并观察病理组织学变化。结果显示,粪肠球菌的LD50为7.59×10^8CFU;感染小鼠后,其致死率1/2 LD50剂量组为3.7%,小于2/3 LD50剂量组的13.0%;1/2 LD50剂量组脑组织开始出现病理变化是在感染后12 h,晚于2/3 LD50剂量组(6 h),病理变化与后者相比较轻。结果表明,选择以2/3 LD50剂量为小鼠感染模型的最佳剂量。该动物模型的建立为进一步研究粪肠球菌感染小鼠导致脑炎奠定了基础。     

江淮地区猪链球菌和肠球菌分离株的鉴定、分型及药物敏感性分析

为了解江淮地区猪链球菌(SS)和肠球菌分离株的血清型或基因型分布特征及临床耐药性,本研究对江淮地区临床病例196株分离菌进行SS与肠球菌的鉴定,采用PCR方法进行SS及其1、2、7、9血清型和mrp、ef、sly毒力基因型鉴定;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析SS和肠球菌基因型;K-B法测定其药物敏感性。结果显示,在196株分离菌中,鉴定出112株SS,40株肠球菌。血清型2型SS 44株(39.3%)为优势血清型,ef^-/mrp^-/sly^-型SS 36株(32.1%)为优势毒力基因型,Ps28 18株(16.1%)和Ps27 14株(12.5%)为优势PFGE基因型。肠球菌中屎肠球菌21株(52.5%)为优势菌,Pe12 9株(22.5%)和Pe7 7株(17.5%)为肠球菌优势PFGE基因型。SS和肠球菌对20种药物均表现出不同程度的耐药,耐8种以上药物的菌株数分别占85.7%(96/112)和95%(38/40)。结果表明,江淮地区SS和肠球菌种型复杂,已经成为引起猪细菌性疾病的重要致病菌。分离菌株PFGE基因型均呈多态性,在传播过程中可能存在遗传变异。SS PFGE基因型与血清型、毒力基因型不呈现相关性。菌株耐药现象严重,多重耐药普遍,且耐药谱越来越广。本研究为江淮地区SS和肠球菌的分子流行病学研究及相关疫病防控提供科学依据。     

Analysis of Ribosome Genotyping and Antimicrobial Resistance in Enterococcus faecalis Isolated from Pigs and Chickens

This study was to investigate the ribosome genotyping and antimicrobial resistance in Enterococcus faecalis strains isolated from 2 large-scale farms in Shanghai.40 isolates were evaluated for their sensitivity to 12 antimicrobial agents by broth microdilution,and the ribosome genotyping (ribotype) was characterized by the Riboprinter^® Microbial Characterization System.The resistance rates of most antimicrobial drug were relatively high and multidrug resistant strains were detected with more than 80%.4 strains of Enterococcus faecalis isolated from pigs were resistant to vancomycin,including 2 strains of vancomycin highly resistant (MIC>64 mg/L) with the same time highly resistant to gentamicin and streptomycin (MIC>2 048 mg/L).The results showed that multidrug resistance of Enterococcus faecalis was a serious issue,and the resistant phenotypes of the same type of ribotype was not entirely consistent.     

屎肠球菌和枯草芽孢杆菌对乳鸽生长性能、屠宰性能和免疫功能的影响

旨在研究单独添加屎肠球菌和枯草芽孢杆菌及二者混合添加对乳鸽生长性能、屠宰性能、免疫功能的影响,从而探究益生菌对乳鸽生长的调控机制。试验选取240只12日龄、体重接近的健康白羽王鸽,随机分成4组,分别为对照组、屎肠球菌组、枯草芽孢杆菌组、混合组,每组6个重复,每个重复10只乳鸽,试验期16 d。试验期结束时,每个重复随机选取2只乳鸽（共48只乳鸽）称重,测定其血清免疫指标、肌肉品质、肝组织抗氧化指标和生长相关基因表达量等。试验结果表明：1）与对照组相比,屎肠球菌组显著提高了乳鸽的平均日增重（P<0.05）,且显著高于其余各组（P<0.05）,而枯草芽孢杆菌组显著降低了乳鸽的平均日增重（P<0.05）;2）与对照组相比,3个处理组对乳鸽的屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率、胸肌率、腹脂率均无显著影响（P>0.05）,屎肠球菌组和混合组显著提高了乳鸽胸肌亮度（P<0.05）,混合组还显著提高了乳鸽胸肌红度（P<0.05）;3）与对照组相比,屎肠球菌组和混合组能显著提高乳鸽血清中IgG含量（P<0.05）,混合组能显著提高乳鸽胸腺指数和法氏囊指数（P<0.05）,除屎肠球菌组GLB显著高于对照组（P<0.05）外,3个处理组对乳鸽的其余血清生化指标均无显著影响（P>0.05）;4）与对照组相比,屎肠球菌组超氧化物歧化酶（SOD）活性显著提高（P<0.05）,混合组谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著提高（P<0.05）;5）3个处理组肝组织的GH、IGF-1基因mRNA表达水平均显著高于对照组（P<0.05）,枯草芽孢杆菌组GHR基因mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.05）。综上所述,屎肠球菌可显著提高乳鸽平均日增重,而枯草芽孢杆菌显著降低了乳鸽的平均日增重;屎肠球菌能改善乳鸽肌肉品质,提高乳鸽抗氧化性能和免疫功能,从而促进乳鸽生长。